Sa differential determination ng enterobacteria at ilang vibrios, ang reaksyon ng Voges-Proskauer ay sumasakop sa isang espesyal na lugar. Ang pagsusuri ay batay sa kakayahan ng bacteria na mag-ferment ng glucose upang bumuo ng acetoin.
Ang esensya ng proseso ng pananaliksik
Sa microbiology, ang reaksyon ng Voges-Proskauer ay kadalasang ginagamit upang matukoy ang pagkakaiba sa loob ng Yersinia family ng enterobacteria (kabilang ang mga pathogens ng pseudotuberculosis at enterocolitis), Escherichia coli, at spore-forming aerobes. Nakikita ang resulta sa pamamagitan ng pagkulay sa medium kapag nagdagdag ng ilang partikular na reagents.
Ang pagsusulit na ito ay nabibilang sa IMViC series (abbreviation ng Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - isang pangkat ng mga pagsusuri sa pagkakakilanlan kabilang ang mga differential definition:
- na may indole, batay sa paghahati ng tryptophan sa indole, na ginagamit sa pagkakaroon ng Kovacs o Ehrlich reagent;
- gamitmethylroth, o methyl red, na nakakakita ng ibinigay na pH bilang resulta ng glucose metabolism;
- Mga reaksyon ng Voges-Proskauer para sa pagtuklas ng acetyl-methylcarbinol;
- paggamit ng citrate na may pagbabago ng kulay bilang resulta ng alkalization ng medium.
Ang esensya ng proseso ay ang visualization ng presensya ng na-diagnose na bacteria dahil sa interaksyon ng acetoin na nabuo ng mga ito na may caustic potash sa presensya ng oxygen. Ang acetyl-methylcarbinol ay na-oxidize sa diacetyl, na bumubuo ng maliwanag na pula o pink na tambalan. Dagdagan ang sensitivity ng pagsubok sa pamamagitan ng pagpapakilala ng alpha-naphthol bago magdagdag ng caustic potash.
Setting ng pagsubok
Ang pagbabalangkas ng reaksyon ng Voges-Proskauer ay kinabibilangan ng paunang paglilinang ng mga mikroorganismo. Isang purong kultura ang inihasik sa differential diagnostic medium ng Clark, isang pagkakaiba-iba nito ay ang sabaw ng Clark (nang walang pagdaragdag ng agar-agar). Ang alinman sa handa na daluyan ay ginagamit, o inihanda nang nakapag-iisa. Kasama sa mga sangkap ang:
- 5g peptone;
- 5g glucose;
- 5g dibasic potassium phosphate;
- 1L distillate.
Sa panahon ng pag-aaral, ang kultura ay inoculated na may sterile bacteriological loop sa isang likidong daluyan. Dami - 5 ml sa isang test tube kasama ang kontrol. Ang pagpapapisa ng itlog ay isinasagawa sa temperatura na 35-37 degrees sa loob ng dalawang araw. Susunod, ang isang pag-aaral ng reaksyon ng Voges-Proskauer ay isinasagawa sa mga yugto:
- 2, 5 ml ng broth culture ang inilipat sa sterile tube.
- Magdagdag ng anim na patak ng alpha-naphthol (5% alcohol solution).
- Magdagdag ng 40%isang solusyon ng caustic potassium sa halagang 0.1 ml, o dalawang patak.
- Isinasagawa ang paghahalo sa pamamagitan ng marahang pag-alog ng test tube.
- Suriin ang resulta pagkatapos ng 15 minuto mula sa simula ng eksperimento.
Ang isang alternatibong paraan ng pagsubok ay ang overnight incubation, na ang oras ay binabawasan sa 18 oras o hanggang isang araw. Bilang karagdagan sa pamamaraang ito, ang isang express test ay ginagamit din: ang isang kultura ay ipinakilala sa isang loop sa 2 ML ng daluyan, incubated para sa halos apat na oras, pagkatapos reagents ay idinagdag sa isang pantay na halaga ng 2-3 patak, halo-halong at ang sinusuri ang resulta pagkatapos ng sampung minuto.
Ang kontrol ay isa sa mga sanhi ng pneumonia Klebsiella pneumoniae - strain atcc 13883.
Pagsusuri ng resulta
Pagkatapos ng kinakailangang oras pagkatapos idagdag ang mga reagents (mula 5 hanggang 15 minuto), dapat na obserbahan ang isang cherry-red na kulay na may binibigkas na positibong reaksyon, pula at rosas - na may mahinang positibong reaksyon. Walang pagbabagong naitala bilang negatibong resulta.
Ang labis na caustic potash sa isang solusyon ay maaaring magbigay ng imitasyon ng isang positibong reaksyon, paglamlam sa isang kulay na tanso. Sa kasong ito, dapat na maitala ang negatibong tugon ng nasubok na kolonya. Gayundin, lumilitaw ang paglamlam ng tanso sa mga kaso kung saan ibinibigay ang pagtatasa isang oras pagkatapos ng pagpapakilala ng mga reagents.
Kapag sinusuri ang resulta, dapat isaalang-alang na ang matagal na paglilinang ng mga pinag-aralan na mikroorganismo (higit sa tatlong araw) ay humahantong sa pag-aasido ng daluyan, na maaaring humantong sa isang hindi tamang resulta ng pag-aaral. Ang reaksyon ay maaaring medyo positibo ofalse negative.
Mga kinakailangan para sa mga pansubok na reagents
Dapat matugunan ng mga reagents ng Voges-Proskauer ang mga kinakailangan tulad ng tamang konsentrasyon, mataas na kadalisayan at katatagan, na nakakamit sa pamamagitan ng wastong imbakan.
Ang mga ready-to-use na test kit ay karaniwang naglalaman ng mga reagents para sa 100 o higit pang gamit at nasa plastic o tinted na glass vial. Ang kalidad ay kinokontrol ng nauugnay na dokumentasyon.
